仪器生产商： 美国Malvern

资产编号： 1408590

资产负责人： 陈俊杰

购置日期：2018-07-01

仪器产地：美国

仪器供应商：

购买经办人：陈玉红

主要配件：

主要参数：

仪器介绍：iTC200 系统是一套高灵敏度的等热滴定热量计。通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线，原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。在反应过程中涉及到的热动力学参数，如结合常数、结合位点数、反应焓变及熵变等，这些热动力学参数可以经等温滴定量热仪自带的软件拟合处理获得，并经过软件处理间接获得吉布斯自由能、恒压摩尔热熔等。

应用领域：1、大分子间相互作用：包括抗原与抗体相互作用，分子伴侣与客户蛋白相互作用，蛋白与核酸、核酸与核酸间相互作用，多糖与蛋白间相互作用等； 2、大分子与小分子相互作用：核酸与小分子、蛋白配体与小分子受体及蛋白与多肽药物间的相互作用研究； 3、药物筛选：通过测定药物与靶蛋白间的结合常数来判断二者间结合的强弱，通过测定反应中焓和熵的改变量，可以分析出药物与靶蛋白是以何种方式结合，综合两方面的数据评估二者的相互作用情况。该技术可用于医药，也可用于农药及畜牧药的筛选； 4、酶促反应动力学：监测酶催化底物水解过程中的热效应，通过计算可以获得底物水解的速率，米氏常数、转换速率常数及焓变等。还可以通过添加抑制剂获得抑制常数及半抑制率IC50等。

管理规则：1、首次使用前，须与管理员确认实验的样品、方式及想获得的结果等信息，经管理确认仪器的条件能满足检测需求，方可进行预约使用； 2、首次使用人员，须与管理员电话或当面预约使用时间，待管理员协调工作时间后再进行预约； 3、经管理员确认具有独立上机资质用户，可以于任何时段通过免审核预约的方式直接上机使用； 4、使用过程须按照管理员指导的规范进行操作，使用结束后须对仪器进行清洁，并及时关闭仪器，若发现违规者视情节严重将分别按以下方式进行追责：暂时停用、注销中心测试账户、赔偿仪器维修款、上报学院处分等。

实验规则：ITC200型微量量热仪只接受流动性较高的液体样本，无法检测气态、固态或粘稠度较高的液态样本。液体样本一般建议基于水配置的溶液，不接受挥发性的有机溶剂。 1、对于已知解离常数KD，但未知热变化水平的实验： 被滴定物浓度要求：10~1000 KD 被滴定物体积要求：400 μl 滴定物浓度要求：必须同时满足大于等于20倍被滴定物浓度且超过KD 滴定物体积要求：100 μl 备注：若须获得理想数据，建议被滴定物浓度为解离常数的10-1000倍，若由于溶解度等原因浓度无法满足上述要求，可视滴定热变化情况，在满足仪器最低检测量度内使用低浓度检测。 2、对于未知解离常数KD，且未知热变化水平的实验 被滴定物浓度要求：50 μM及以上 被滴定物体积要求：400 μl 滴定物浓度要求：大于等于20倍被滴定物浓度 滴定物体积要求：100 μl 备注：样品母液浓度尽量高，可现场稀释，现场须带50 ml相应的buffer来稀释。 3、滴定物与被滴定物buffer匹配问题 ITC是一款灵敏的热量检测仪，微量的热变化都能被监测到。在滴定过程中，除了产生反应热外，还有可能会产生其他的热变化：如稀释热、中和热等，因此，在进行滴定时须务必满足一个大原则——滴定物与被滴定物所处的buffer环境完全一致。 以下列举部分经常导致的buffer不一致的原因： 1）缓冲溶液不是同一批，盐浓度和PH都可能存在差异； 2）滴定物母液与实验buffer不一致，稀释过程中引入部分母液中的成分，建议被滴定物也按相应比例引入滴定物母液中的成分； 3）被滴定物源于各种生物方法提取，溶液置换不完全。建议使用凝胶脱盐或超滤等方法置换buffer，收集超滤下的buffer或者凝胶脱盐buffer作为滴定物的稀释buffer。

培训指南：