Explorer G3 workstation自动化药物筛选系统操作简章

本操作简章用于规范仪器标准操作流程，为仪器使用者提供简要的步骤索引提示，保障仪器在工作中维持正常稳定的状态。

1、开机前准备工作

确认以下自动化系统中所有设备均处于“Power Off”状态

4度冰箱、撕膜机、封膜机、条码打印机（两个开关）、堆板栈、二氧化碳培养箱、EL406分液洗板一体机、冷冻离心机、JUNAS及分液机。

2、开启Explorer G3 workstation自动化系统

1）打开workstation中控“电源总闸”；

2）等待15 s后确认指示灯常亮，点击“设备供电按钮”及“电灯按钮”，如有需要可开启“Hepa过滤系统”；

3）依次开启所有设备物理开关：4度冰箱、撕膜机、封膜机（如须使用，同时打开气阀，90PSI）、条码打印机（两个开关）、堆板栈Hotel、二氧化碳培养箱Incubator、EL406洗板机、冷冻离心机、Nivo酶标仪、JANUS及Multidrop分液机。备注：JANUS电脑及中控电脑ARS通电自启动，无须单独开启；

4）确认所有气阀均已开启

气瓶室依次打开空压机开关、二氧化碳（一般情况下是不关闭的）及氮气阀门，确保三种气体压力达到以下水平：

CO2读数：0.1MP（二氧化碳气瓶罐上数值）

N2读数：0.6MP（氮气气瓶罐上数值）

空气读数：100PSI（空压机上数值）

再次确认自动化系统中位于培养箱底部旁三种气体的压力阀数值

CO₂读数：0.1MP

N2读数：0.6MP 100PSI

空气读数：0.5MP 90PSI

3、开启plate::works自动化系统中控软件

1）通过中控电脑访问JANUS电脑主机，打开JANUS控制软件WinPREP后对JANUS进行初始化

Untilities→Setup→Instrument→Initialize

JANUS的Varispan工作前必须做Flush&Wash（可单机操作，也可在plate::works的Entry Method内编入Flush&Wash并调用，建议Flush&Wash次数为3次，每次8000ul）

2）打开plate::works控制软件，进入Service，对4度冰箱4INC、二氧化碳培养箱INC及堆板栈HTL进行初始化:

具体操作：右击INC\4INC\HTL，MODE ON，Initialize ALL

3）贴码机初始化,单机操作点击Sciprint-MP2软件，选择“COM5”进入程序，选择Diagnostics→Prime Label→点击Prime Labeler， 3张（两个yes一个no）；

4）EL406分液洗板一体机单机使用需要Prime，打开Liquid Handling软件，选择须使用的程序W(wash)\P(pump)\S(syringe)完成prime；若使用plate::works调用的话，则在EntryMethod处添加Prime程序，一般建议单机先做好Prime。使用前先确认PeriPump的规格，并使用ddH2O和70% Ethanol反复Primer 3次冲洗管路，最后一遍用70% Ethanol进行Primer，并将吸液管置于空气中Primer 2次；

Syringe管路的清洗与PeriPump清洗方式一致；

Wash管路则在确认清洗桶内有工作液的基础上做一次Primer即可；

5）Multidrop分液器清洗：

Multidrop分液器只有一个PeriPump，清洗方式与EL406的PeriPump相同；

6）酶标仪Nivo初始化：

具体操作：打开plate::works控制软件，进入Service，右击NIVO，MODE ON，Initialize ALL。若初始化不成功先观察中控台下方的网口5及Nivo后方的网口是否闪烁，接着通过plate::works中控电脑的浏览器访问：http://192.168.99.31，看是否能与Nivo通讯。

4、进入plate::works工作流程编辑系统

1）程序编辑；

2）模拟运行，检测程序可行性；

3）检查JANUS工作站所须的纯水是否足够；EL406清洗桶内的清洗液是否足够；清空JANUS旁废液桶内的废液；

4）按实验需要准备好EL406及Multidrop所须的反应液或细胞液；

5）将实验所须的枪头盒、测试板、细胞板、化合物板依次对应存入堆板栈、培养箱和4度冰箱内；

6）严格按照JANUS程序内板位将对应的Labware放入JANUS工作站内。

5、关机顺序

1）访问JANUS电脑主机，通过将JANUS所有机械臂“Park all Arms”，关闭JANUS电脑（注意：是关闭电脑不是关闭远程控制）

Untilities→Setup→Instrument→Park all Arms

2）清空4度冰箱、培养箱、堆板栈、Multidrop、EL406、撕膜机、封膜机、打码器、JANUS工作台、冷冻离心机及Nivo内所有测试板；

3）清洗EL406和Multidrop

EL406清洗：使用70% Ethanol和ddH2O反复Primer 3次冲洗管路，并将吸液管置于空气中Primer 2次，Syringe管路的清洗与PeriPump清洗方式一致。清洗桶内的清洗液必须倒掉，不得长时间留在清洗桶内。应及时将废液桶内的废液倒掉，禁止废液长时间滞留在桶内；

Multidrop清洗：使用70% Ethanol和ddH2O反复Primer 3次冲洗管路，并将吸液管置于空气中Primer 2次，及时清理废液桶。

4）关闭plate::works控制软件；

5）按顺序关闭以下所有子设备电源；

4度冰箱、撕膜机、封膜机、条码打印机（两个开关）、堆板栈、二氧化碳培养箱、EL406洗板机、冷冻离心机、Nivo酶标仪（长按电源键3秒）、JANUS及Multidrop分液机；

6）关闭封膜机上的气阀；

7）关闭中控电脑主机；

8）关闭“设备供电按钮”及“电灯按钮”，如开启“Hepa过滤系统”，也单击按钮关闭，最后关闭电源总闸；

9）关闭气瓶室内空压机电源，关闭氮气阀门，一般情况下不关闭二氧化碳阀门。注：一般情况下不关闭自动化系统内的减压阀。

10）收拾并清理自动化系统所有台面。

6、注意事项汇总

1、打码器的Printer上有两个开关，开机时须注意。Printer的primer必须在打开plate::works控制软件前完成，否则运行程序时会报错；

2、为防止回流导致加样板前几个孔精度不准，除在实验开始前做的大体积Primer外，Multidrop和EL406的PeriPump在每块测试板加样前都需要嵌入一个小体积的primer；

3、JANUS移液工作站上Varispan的Flush&Wash要先做，且要选对泵，其中Flush使用syringe，而Wash使用PeriPump；

4、开机后应先检测Nivo网卡通讯灯是否点亮，通过浏览器登录Nivo，首先检测板位内是否有未取出的测试板；

5、JANUS的泵使用前要及时打开，用完后随手关闭；

6、确保4度冰箱、培养箱、堆板栈、Multidrop、EL406、撕膜机、封膜机、打码器、JANUS工作台、冷冻离心机及Nivo内所有测试板清空，尤其注意Nivo内的测试板。在更换堆板栈内测试板时务必点亮堆板栈下方的绿色按钮，再旋转堆板栈内转盘取板；

7、确保JANUS工作站内的板位摆放和所使用的程序完全一致，尤其确认程序中使用的是Solid Med Support Tile或是Plate Adapter Support Tile；

8、使用pintool前，先空跑测试一下pintool的加样全过程，一方面检验pintool移位的顺序，另一方面也可以保证pintool的冲洗池液体注满；

9、EL406和Multidrop所使用的buffer须经过0.44um滤膜过滤；

10、使用EL406和Multidrop时尤其应注意所使用的PeriPump的规格（1μL或5μL）与程序内的选项是否一致，不一致会导致加样严重误差。其中Multidrop的PeriPump规格选择在plate::works的Entry method内设置，EL406则在Liquid Handling Control 2.16软件中设置好后上传至“On broad”后内嵌于程序内。

整理人：陈俊杰、叶明杰

审核人：周虎

                                  整理时间：2020年6月10日